Bepaling fan oksaalsoergehalte yn fruit en griente troch hege-prestaasje floeistofchromatografy (HPLC)

Bepaling fan Oksaalsoer Ynhâld yn fruit en grienten troch hege-prestaasje floeistofchromatografy (HPLC)
1. Eksperiminteel prinsipe en metoadeûntwerp
As in gewoan organysk soer yn fruit en griente, beynfloedet it oksaalsoergehalte direkt de smaak en fiedingswearde fan iten. Dit eksperimint brûkt omkearde-faze hege-prestaasje floeistofchromatografy (RP-HPLC). Under soere mobile-faze-omstannichheden wurdt oksaalsoer basisline-skieden fan ynterferearjende stoffen mei in C18-chromatografyske kolom. In ultravioletdetektor ynsteld op 210 nm wurdt brûkt foar kwantitative analyze, basearre op de UV-absorpsjekarakteristiken fan 'e karboksylgroepen yn oksaalsoermolekulen.
2. Standertkromme en tarieding fan stekproef
In gradiëntferdunningsmetoade wurdt brûkt om standertoplossingen ta te rieden: weagje sekuer 25,0 mg oksaalsoerdihydraat en verdun it oant 25 mL mei ultrasuver wetter om in stamoplossing fan 1 mg/mL te krijen. Dit wurdt efterinoar verdund yn in searje standertoplossingen fan 50, 100, 200, 400 en 800 µg/mL, wêrby't elke konsintraasje yn triplikaat ynjektearre wurdt.
Foar de tarieding fan in stekproef wurdt ekstraksje mei mikrogolf brûkt: weagje 5,00 g fruit-/grientehomogenaat, foegje 10 mL fan 0,1 mol/L sâltsoeroplossing ta, behannelje by 60 °C mei de mikrogolf foar 10 minuten, filterje troch in 0,45 µm membraanfilter, en sammelje it filtraat foar testen.
3. Optimalisaasje fan chromatografyske omstannichheden
De mobile faze is in 0,01 mol/L kaliumdihydrogenfosfaatbuffer (pH 2,5)-acetonitril (95:5) systeem, mei in streamingsnelheid fan 0,8 mL/min en in kolomtemperatuer fan 35 °C. It oanpassen fan 'e acetonitril-ferhâlding lit sjen dat as de organyske faze mear as 10% is, de retinsjetiid fan oksaalsoer koarter wurdt nei minder as 3 minuten, mar peak tailing komt foar. Under de definitive optimalisearre omstannichheden is de retinsjetiid fan oksaalsoer 4,2 minuten, wêrtroch't in folsleine skieding fan oanbuorjend sitroensoer en appelsoer berikt wurdt (resolúsje > 1,5).
4. Metoadevalidaasje
Ferifikaasje fan it lineêre berik lit in goede lineêre relaasje sjen tusken peakgebiet en konsintraasje yn it berik fan 10–1000 µg/mL (R² = 0.9993). De deteksjelimyt (LOD), bepaald troch de signaal-ruisferhâldingsmetoade, is 0.5 µg/mL. Yn werhellingstests is de RSD foar seis replikaatbepalingen fan itselde spinaazjemonster 1.8%. Spike-hersteleksperiminten op trije nivo's (80%, 100% en 120%) jouwe gemiddelde herstel fan respektivelik 98.2%, 102.4% en 97.8%, en foldogge oan de easken foar kwantitative analyze.
5. Analyse fan echte samples
Seis kommersjeel beskikbere fruchten en grienten waarden test: spinaazje (356 ± 12 mg/100 g), selderij (215 ± 9 mg/100 g), tomaat (18 ± 2 mg/100 g), appel (6 ± 1 mg/100 g), banaan (net ûntdutsen), en brokkoli (89 ± 5 mg/100 g). In ferliking mei de nasjonale standertmetoade (GB 5009.277-2016) lit sjen dat de relative ôfwiking tusken de twa metoaden minder as 5% is, wat de betrouberens fan dizze metoade ferifiearret. Benammen de HPLC-metoade toant in hegere gefoelichheid as tradisjonele titraasjemetoaden by it analysearjen fan samples mei in leech gehalte.
6. Wichtige notysjes
Kontrolearje de pH-wearde strang tidens de foarbehanneling fan it monster. As de pH fan it ekstrakt heger is as 3, sil kalsiumoksalaatdelslach liede ta lege testresultaten. De mobile faze moat alle dagen farsk taret wurde om sâltdelslach en kolomblokkade te foarkommen. Nei elke 20 ynjeksjes, spielje de kolom 30 minuten mei acetonitril-wetter (30:70) om de effisjinsje fan 'e kolom te foarkommen. Foar pigmenthâldende monsters (bygelyks, pearse koal) wurdt it oanrikkemandearre om in suveringsstap foar fêste-faze-ekstraksje ta te foegjen foar ynjeksje.
7. Tapassing en útwreidingsrjochtlinen
Dizze metoade kin útwreide wurde nei it opspoaren fan oksaalsoer yn biologyske samples lykas urine en bloed. Troch it oanpassen fan 'e gearstalling fan 'e mobile faze (bygelyks troch it tafoegjen fan tetrabutylammoniumhydroxide) kinne oksaalsoer en syn metaboliten tagelyk bepaald wurde. Yn kombinaasje mei in massaspektrometryske detektor kin in krekter spoardeteksjemetoade fêststeld wurde. Yn 'e fiedingsferwurkingssektor kin dizze metoade wichtige gegevensstipe leverje foar de seleksje fan farianten mei leech oksaalsoergehalte en de optimalisaasje fan kookprosessen.